طراحی، سنتز، همسانه سازی و ارزیابی بیان پروتئین دفنزین گندم (triticum aestivum) در میزبان اشریشیا کولای

دفنزین های گیاهی، خانواده ای از پپتیدهای ضد میکروبی کاتیونی کوچک ) 60 - 45 آمینو اسید( وغنی از سیستئین هستند که برای آنها طیف گسترده ای از فعالیت های ضد میکروبی از قبیل، تاثیرات بازدارندگی رشد بر طیف وسیعی از قارچها و باکتریهای گرم مثبت و گرم منفی نسبت داده شده است. ژن دفنزین گندم (k9m2t4) ، پروتئینی با 59 آمینو اسید کد می کند . هدف این مطالعه طراحی، سنتز، همسانه سازی و بیان پروتئین دفنزین گندم است. در این مطالعه ژن دفنزین جهت بیان بیشتر در سویه ی اریگامی origami) ( باکتری e. coli ، بهینه سازی شده و به ژن سومو متصل گردید. ژن سومو پروتئینی را با خاصیت چاپرونی کد می کند که تاخوردگی مناسب پروتئین دفنزین را تسهیل کرده و حلالیت آن را افزایش می دهد، سپس توالی ترکیبی )دفنزین _سومو( در وکتور pet-32a(+) همسانه سازی و نتیجه ی آن برای انتقال به سلولهای باکتریایی (e.coli origami) مورد استفاده قرار گرفت، باکتریها در محیط کشت luria-bertani تحت القای iptg یک میلی مولار در 30 درجه سانتی گراد رشد کردند و پروتئین ترکیبی در (e.coli origami) بیان شد. پروتئین ترکیبی با وزن مولکولی 38 کیلودالتون روی ژل sds-page آنالیز شد و توسط وسترن بلات و دات بلات تائید گردید. بیشترین بیان در 6 ساعت پس از القای iptg روی ژل sds-page مشاهده گردید ونتایج وسترن بلات و دات بلات نشان داد که پروتئین نوترکیب به طور اختصاصی به آنتی بادی mouse anti-(his) 6 peroxidase متصل گردیده است. همچنین هاله های عدم رشد در محیطکشت مولرهینتون آگار، خاصیت ضد باکتریایی پروتئین نوترکیب را نشان داد.